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附　錄　B
產(chǎn)品微生物檢測方法
B.4　銅綠假單胞菌檢測方法
B.4.1　操作步驟
B.4.1.1　增菌培養(yǎng)：取樣液 5.0 mL，加入到 50 mL SCDLP（Soya Casein Digest Lecithin Polysorbate 簡稱）培養(yǎng)液中，充分混勻，置 36 ℃±1 ℃ 培養(yǎng) 18 h～24 h。如有銅綠假單胞菌生長，培養(yǎng)液表面呈現(xiàn)一層薄菌膜，培養(yǎng)液常呈黃綠色或藍綠色。
B.4.1.2　分離培養(yǎng)：從培養(yǎng)液的薄菌膜處挑取培養(yǎng)物，劃線接種十六烷基三溴化銨瓊脂平皿，置36 ℃±1 ℃ 培養(yǎng) 18 h～24 h，觀察菌落特征。銅綠假單胞菌在此培養(yǎng)基上生長良好，菌落扁平無定型，向周邊擴散，或蔓延，表面濕潤，菌落呈灰白色，菌落周圍培養(yǎng)基常擴散有水溶性色素。在缺乏十六烷基三溴化銨瓊脂時也可用胺培養(yǎng)基進行分離，將菌懸液劃線接種于平皿上，放 36 ℃±1 ℃ 培養(yǎng)18 h～24 h，觀察菌落特征。銅綠假單胞菌在此培養(yǎng)基上生長良好，菌落扁平，邊緣不整，菌落周圍培養(yǎng)基略帶粉紅色。
B.4.1.3　染色鏡檢：取鑒定培養(yǎng)基上可疑菌落涂片作革蘭染色，鏡檢為革蘭陰性菌者還需進行下列試驗。
B.4.1.4　氧化酶試驗：取一小塊潔凈的白色濾紙片放在平皿內(nèi)，用無菌玻棒挑取鑒定培養(yǎng)基上可疑菌落涂在濾紙片上，然后在其上滴加一滴新配制的 1％二對苯二胺試液，30 s 內(nèi)出現(xiàn)粉紅色或紫紅色，為氧化酶試驗陽性，不變色者為陰性。亦可使用商品化的氧化酶試紙或試劑進行檢測。
B.4.1.5　綠膿菌素試驗：取鑒定培養(yǎng)基上 2 個～3 個可疑菌落，分別接種在綠膿菌素測定用培養(yǎng)基斜面，36 ℃±1 ℃ 培養(yǎng) 24 h，加入三氯 3 mL～5 mL，充分振蕩使培養(yǎng)物中可能存在的綠膿菌素溶解，待三氯呈藍色時，用吸管移到另一試管中并加入 1.0 mol/L 的 1 mL，振蕩后靜置片刻。如上層出現(xiàn)粉紅色或紫紅色即為陽性，表示有綠膿菌素存在。
B.4.1.6　鹽還原產(chǎn)氣試驗：取鑒定培養(yǎng)基上可疑菌落接種在鹽胨水培養(yǎng)基中，置 36 ℃±1 ℃ 培養(yǎng) 24 h，培養(yǎng)基小倒管中有氣者即為陽性。
B.4.1.7　明膠液化試驗：取鑒定培養(yǎng)基上可疑菌落純培養(yǎng)物，穿刺接種在明膠培養(yǎng)基內(nèi)，置 36 ℃±1 ℃培養(yǎng) 24 h，取出放于 4 ℃～10 ℃，如仍呈液態(tài)為陽性，凝固者為陰性。
B.4.1.8　42 ℃ 生長試驗：取鑒定培養(yǎng)基上可疑培養(yǎng)物，接種在普通瓊脂斜面培養(yǎng)基上，置 42 ℃ 培養(yǎng)24 h～48 h，有銅綠假單胞菌生長為陽性。
B.4.1.9　其他檢驗：使用生化鑒定試劑或生化鑒定卡的，依據(jù)商品試劑說明書對可疑菌落進行鑒定。
B.4.2　結(jié)果報告
被檢樣品經(jīng)增菌分離培養(yǎng)后，證實為革蘭陰性桿菌，氧化酶及綠膿菌素試驗均為陽性者，即可報告被檢樣品中檢出銅綠假單胞菌。如綠膿菌素試驗陰性而液化明膠、鹽還原產(chǎn)氣和 42 ℃ 生長試驗三者皆為陽性時，仍可報告被檢樣品中檢出銅綠假單胞菌。

附　錄　E
產(chǎn)品殺菌性能、性能與穩(wěn)定性檢測方法
E.6.6　振蕩燒瓶試驗
E.6.6.1　適用范圍
適用于對含非溶出性物質(zhì)的材料的性能檢測。
注1：在進行振蕩燒瓶試驗前，需要鑒定其成分是否可溶出，如果有溶出性材料，參照可溶出材料檢測；無溶出性材料，選用振蕩燒瓶法進行。
注2：非溶出性材料的鑒定：將樣品置于無菌蒸餾水浸泡 24 h（通過預(yù)試驗，吸取的浸泡液需滿足后續(xù)檢測要求），取浸泡液參照 E.6.1 劑性能試驗或參照 E.6.4 環(huán)試驗檢驗是否有效果。如果無效果，說明樣品屬非溶出性材料，進行振蕩燒瓶試驗。
E.6.6.4　評價標準
E.6.6.4.1　各次試驗陰性對照均應(yīng)無菌生長。
E.6.6.4.2　不加樣片組活菌計數(shù)在 1.0×10 4 CFU/片～9.0×10 4 CFU/片之間，且樣品振蕩前后平均菌落數(shù)差值在 10％以內(nèi)，試驗有效。
E.6.6.4.3　各次試驗中，試驗樣片率與對照樣片率的差值大于 26％，產(chǎn)品具有作用。

附　錄　E
產(chǎn)品殺菌性能、性能與穩(wěn)定性檢測方法
E.6.3　載體試驗
E.6.3.1　適用范圍
適用于含溶出性成分的濕巾、無紡布口罩、衛(wèi)生巾、護墊、尿布等固體類產(chǎn)品對微生物效果的測定。
E.6.3.2　試驗步驟
取試驗菌 24 h 新鮮斜面培養(yǎng)物用 PBS 洗下，用 PBS 稀釋至 5.0×10 5 CFU/mL～5.0×10 6 CFU/mL，制成菌懸液備用。
用剪刀在無菌條件下將試驗樣品和對照樣品分別剪成 20 mm×30 mm 樣片備用。試驗時滴加100 μL 菌懸液。對照樣片染菌前需經(jīng)壓力蒸汽。取無菌平皿，用無菌鑷子取 2 片試驗樣片，勿重疊，置 20 ℃±1 ℃ 水浴 5 min，在每一樣片上滴加 100 μL 試驗用菌懸液，立即計時。待試驗菌與樣片接觸作用至說明書的規(guī)定時間，分別夾取染菌樣片加于 5.0 mL PBS 試管中，混勻。振蕩洗脫，分別吸取1.0 mL 樣液，按活菌培養(yǎng)計數(shù)方法測定存活菌數(shù)，每管樣液接種 2 個平皿。如平板上生長的菌落數(shù)較多時，可 10 倍系列稀釋后，再進行活菌培養(yǎng)計數(shù)。
同時用與試驗樣品同質(zhì)材料不含成分的對照樣片 2 片代替試驗樣片進行試驗，作為陽性對照，陽性對照回收菌量為 1.0×10 4 CFU/片～9.0×10 4 CFU/片；取同批次 PBS、培養(yǎng)基作陰性對照。
所有試驗樣本和對照樣本均在 36 ℃±1 ℃ 培養(yǎng) 48 h（細菌）或 72 h（酵母菌），進行活菌菌落計數(shù)。試驗重復(fù) 3 次，計算率。
E.6.3.4　結(jié)果判定
各次試驗率 Y 大于或等于 50％到小于 90％之間，判有作用；各次試驗率大于或等于90%，判有較強作用。



以下內(nèi)容轉(zhuǎn)自“食品接觸材料科學(xué)”公眾號，原標題《造紙化學(xué)品中氯.丙.醇的測試方法團標發(fā)布》，此公眾由我們總部FCM實驗室運營。
近日，由IQTC提出并推動立項的團體標準 T/CNFIA 206-2024 《造紙化學(xué)品中氯.丙.醇含量的測定 氣相色譜-質(zhì)譜法》已經(jīng)由食品工業(yè)協(xié)會正式發(fā)布。標準已于2024年7月14日起正式實施。標準文本歡迎索閱。
立項背景
GB 4806.8-2022《食品安全國家標準 食品接觸用紙和紙板材料及制品》對食品接觸用紙制品中氯.丙.醇的水提取量設(shè)定了嚴格的要求，現(xiàn)有研究顯示造紙化學(xué)品可能是其主要來源之一，因此控制其含量成為生產(chǎn)企業(yè)亟需解決的重要任務(wù)。
由IQTC牽頭起草的GB 4806.8-2022《食品安全國家標準 食品接觸用紙和紙板材料及制品》中對食品接觸用紙制品中氯.丙.醇的水提取量給出了嚴格的要求，而已有的研究表明，造紙化學(xué)品可能是紙制品中氯.丙.醇的重要來源之一，因此管控造紙化學(xué)品中氯.丙.醇的含量成為食品接觸用紙的生產(chǎn)企業(yè)需要解決的一項重要任務(wù)。
造紙階段用到的大量化學(xué)品中，可能會有部分化學(xué)品中含有來自于氯.丙.醇的氯.丙.醇殘留，隨著生產(chǎn)鏈的傳遞和食品接觸用紙制品向所接觸的食品發(fā)生遷移，氯.丙.醇可能終會隨食品進入，影響消費者健康安全。
但我國對于造紙化學(xué)品中的氯.丙.醇尚缺乏相關(guān)檢測方法標準，這給造紙企業(yè)及上游化學(xué)品生產(chǎn)企業(yè)管控造紙化學(xué)品中的氯.丙.醇帶來困難。為彌補標準領(lǐng)域的這一不足，IQTC于2023年6月向食品工業(yè)協(xié)會提出了團體標準立項申請，并于2023年7月獲得正式立項，總共有12家單位共同參與了為期一年的起草。
參編單位包括：濟寧南天農(nóng)科化工有限公司、四川洋淼環(huán)保科技有限公司、浙江傳化華洋化工有限公司、杭州杭化哈利瑪化工有限公司、廣東良仕工業(yè)材料有限公司、珠海紅塔仁恒包裝股份有限公司、山東奧賽新材料有限公司、愛森（中.國）絮凝劑有限公司、索理思（上海）化工有限公司、廣州海關(guān)技術(shù)中心、保世高（廣州）貿(mào)易有限公司、食品工業(yè)協(xié)會食品接觸材料。
標準主要內(nèi)容
標準適用于檢測造紙化學(xué)品中游離態(tài)氯.丙.醇的含量，涵蓋濕強劑、粘缸劑、防油劑等多種化學(xué)品。通過直接稀釋-氣相色譜-質(zhì)譜法和衍生化反應(yīng)-氣相色譜-質(zhì)譜法兩種方法，分別適用于不同含量級別的化學(xué)品，為造紙企業(yè)和上游化學(xué)品生產(chǎn)企業(yè)提供了科學(xué)的檢測和管控方法。
本標準適用于造紙化學(xué)品中游離態(tài)氯.丙.醇含量的檢測，包括但不限于濕強劑、粘缸劑、防油劑、消泡劑、涂布抗水劑、表面施膠劑、模塑防水劑、改性淀粉、改性松香、改性纖維素、改性樹脂等。
標準采用兩種方法對氯.丙.醇進行檢測：
【方法一】直接稀釋-氣相色譜-質(zhì)譜法
無需使用昂貴的同位素試劑進行衍生化反應(yīng)，測試成本低廉、操作簡便，適用于氯.丙.醇含量在ppm數(shù)量級的造紙化學(xué)品。
▲參考色譜圖【方法一】
【方法二】衍生化反應(yīng)-氣相色譜-質(zhì)譜法
通過衍生化反應(yīng)提高檢測靈敏度，檢出限可低至0.01 mg/kg。
▲參考色譜圖【方法二】

意義和影響
本標準的制定為造紙化學(xué)品生產(chǎn)企業(yè)做好產(chǎn)品中氯.丙.醇的管控、以及造紙企業(yè)做好原材料中氯.丙.醇的管控提供了科學(xué)的檢測方法。這也將為下游紙制品企業(yè)生產(chǎn)的食品接觸用紙和紙制品做好氯.丙.醇的合規(guī)提供重要的解決思路。
IQTC期待與各方開展更多高水平合作，為行業(yè)和相關(guān)部門提供更多高水平技術(shù)服務(wù)和解決方案。

以上內(nèi)容轉(zhuǎn)自“食品接觸材料科學(xué)”公眾號，原標題《造紙化學(xué)品中氯.丙.醇的測試方法團標發(fā)布》，此公眾由我們總部FCM實驗室運營。
我們總部FCM實驗室可以做團體標準 T/CNFIA 206-2024氯.丙.醇含量的測試，有需求的企業(yè)，可以與我們聯(lián)系。
聯(lián)系人：鄒工

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