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附　錄　B
產品微生物檢測方法
B.4　銅綠假單胞菌檢測方法
B.4.1　操作步驟
B.4.1.1　增菌培養：取樣液 5.0 mL，加入到 50 mL SCDLP（Soya Casein Digest Lecithin Polysorbate 簡稱）培養液中，充分混勻，置 36 ℃±1 ℃ 培養 18 h～24 h。如有銅綠假單胞菌生長，培養液表面呈現一層薄菌膜，培養液常呈黃綠色或藍綠色。
B.4.1.2　分離培養：從培養液的薄菌膜處挑取培養物，劃線接種十六烷基三溴化銨瓊脂平皿，置36 ℃±1 ℃ 培養 18 h～24 h，觀察菌落特征。銅綠假單胞菌在此培養基上生長良好，菌落扁平無定型，向周邊擴散，或蔓延，表面濕潤，菌落呈灰白色，菌落周圍培養基常擴散有水溶性色素。在缺乏十六烷基三溴化銨瓊脂時也可用胺培養基進行分離，將菌懸液劃線接種于平皿上，放 36 ℃±1 ℃ 培養18 h～24 h，觀察菌落特征。銅綠假單胞菌在此培養基上生長良好，菌落扁平，邊緣不整，菌落周圍培養基略帶粉紅色。
B.4.1.3　染色鏡檢：取鑒定培養基上可疑菌落涂片作革蘭染色，鏡檢為革蘭陰性菌者還需進行下列試驗。
B.4.1.4　氧化酶試驗：取一小塊潔凈的白色濾紙片放在平皿內，用無菌玻棒挑取鑒定培養基上可疑菌落涂在濾紙片上，然后在其上滴加一滴新配制的 1％二對苯二胺試液，30 s 內出現粉紅色或紫紅色，為氧化酶試驗陽性，不變色者為陰性。亦可使用商品化的氧化酶試紙或試劑進行檢測。
B.4.1.5　綠膿菌素試驗：取鑒定培養基上 2 個～3 個可疑菌落，分別接種在綠膿菌素測定用培養基斜面，36 ℃±1 ℃ 培養 24 h，加入三氯 3 mL～5 mL，充分振蕩使培養物中可能存在的綠膿菌素溶解，待三氯呈藍色時，用吸管移到另一試管中并加入 1.0 mol/L 的 1 mL，振蕩后靜置片刻。如上層出現粉紅色或紫紅色即為陽性，表示有綠膿菌素存在。
B.4.1.6　鹽還原產氣試驗：取鑒定培養基上可疑菌落接種在鹽胨水培養基中，置 36 ℃±1 ℃ 培養 24 h，培養基小倒管中有氣者即為陽性。
B.4.1.7　明膠液化試驗：取鑒定培養基上可疑菌落純培養物，穿刺接種在明膠培養基內，置 36 ℃±1 ℃培養 24 h，取出放于 4 ℃～10 ℃，如仍呈液態為陽性，凝固者為陰性。
B.4.1.8　42 ℃ 生長試驗：取鑒定培養基上可疑培養物，接種在普通瓊脂斜面培養基上，置 42 ℃ 培養24 h～48 h，有銅綠假單胞菌生長為陽性。
B.4.1.9　其他檢驗：使用生化鑒定試劑或生化鑒定卡的，依據商品試劑說明書對可疑菌落進行鑒定。
B.4.2　結果報告
被檢樣品經增菌分離培養后，證實為革蘭陰性桿菌，氧化酶及綠膿菌素試驗均為陽性者，即可報告被檢樣品中檢出銅綠假單胞菌。如綠膿菌素試驗陰性而液化明膠、鹽還原產氣和 42 ℃ 生長試驗三者皆為陽性時，仍可報告被檢樣品中檢出銅綠假單胞菌。

我國一次性衛生用品行業的發展始于上世紀80年代，以衛生巾，行業發展初期較為封閉，廠商生產技術落后，產品種類單一，且消費者對產品尚缺乏了解，普及程度較低。進入上世紀90年代，外資廠商進入，同時紙尿褲市場開始起步，引入了的衛生巾及紙尿褲生產設備和產品，且消費者已形成一定的產品認知和使用習慣，行業開始加速發展。

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產品微生物檢測方法
溶血性鏈球菌檢測方法
B.6.1　操作步驟
B.6.1.1　增菌培養：取樣液 5.0 mL 加入到 50 mL 葡萄糖肉湯中，36 ℃±1 ℃ 培養 18 h～24 h。
B.6.1.2　分離培養：將培養物劃線接種血瓊脂平皿，36 ℃±1 ℃ 培養 18 h～24 h 觀察菌落特征。溶血性鏈球菌在血瓊脂平皿上為灰白色，半透明或不透明，表面突起，圓形，表面光滑，邊緣整齊，周圍有無色透明 β 型溶血。
B.6.1.3　染色鏡檢：挑取典型菌落作涂片革蘭染色鏡檢，應為革蘭陽性，呈鏈狀排列的球菌。鏡檢符合上述情況，還需進行鏈激酶試驗和桿菌肽敏感試驗。
B.6.1.4　鏈激酶試驗：吸取草酸鉀血漿 0.2 mL（0.01 g 草酸鉀加 5.0 mL 兔血漿混勻，經離心沉淀，吸取上清液），加入 0.8 mL 生理鹽水，混勻后再加入待檢菌 24 h 肉湯培養物 0.5 mL 和 0.25％氯化鈣0.25 mL，混勻，放 36 ℃±1 ℃ 水浴中，2 min 觀察一次（一般 10 min 內可凝固），待血漿凝固后繼續觀GB 15979-2024
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察并記錄熔化時間。如 2 h 內不熔化，繼續放置 24 h 觀察，如凝塊全部熔化為陽性，24 h 仍不熔化為陰性 (依據商品試劑說明書)。
B.6.1.5　桿菌肽敏感試驗：將被檢菌懸液涂于血瓊脂平皿上，用鑷子取每片含 0.04 單位桿菌肽的紙片放在平皿表面上，同時以已知陽性菌株作對照，在 36 ℃±1 ℃ 下放置 24 h～48 h，有帶者為陽性。
B.6.1.6　其他檢驗：使用生化鑒定試劑或生化鑒定卡的，依據商品試劑說明書對可疑菌落進行鑒定。
B.6.2　結果報告
鏡檢革蘭陽性鏈狀排列球菌，血瓊脂平皿上呈現溶血圈，鏈激酶和桿菌肽試驗陽性，可報告被檢樣品檢出溶血性鏈球菌。



以下內容轉自“食品接觸材料科學”公眾號，原標題《造紙化學品中氯.丙.醇的測試方法團標發布》，此公眾由我們總部FCM實驗室運營。
近日，由IQTC提出并推動立項的團體標準 T/CNFIA 206-2024 《造紙化學品中氯.丙.醇含量的測定 氣相色譜-質譜法》已經由食品工業協會正式發布。標準已于2024年7月14日起正式實施。標準文本歡迎索閱。
立項背景
GB 4806.8-2022《食品安全國家標準 食品接觸用紙和紙板材料及制品》對食品接觸用紙制品中氯.丙.醇的水提取量設定了嚴格的要求，現有研究顯示造紙化學品可能是其主要來源之一，因此控制其含量成為生產企業亟需解決的重要任務。
由IQTC牽頭起草的GB 4806.8-2022《食品安全國家標準 食品接觸用紙和紙板材料及制品》中對食品接觸用紙制品中氯.丙.醇的水提取量給出了嚴格的要求，而已有的研究表明，造紙化學品可能是紙制品中氯.丙.醇的重要來源之一，因此管控造紙化學品中氯.丙.醇的含量成為食品接觸用紙的生產企業需要解決的一項重要任務。
造紙階段用到的大量化學品中，可能會有部分化學品中含有來自于氯.丙.醇的氯.丙.醇殘留，隨著生產鏈的傳遞和食品接觸用紙制品向所接觸的食品發生遷移，氯.丙.醇可能終會隨食品進入，影響消費者健康安全。
但我國對于造紙化學品中的氯.丙.醇尚缺乏相關檢測方法標準，這給造紙企業及上游化學品生產企業管控造紙化學品中的氯.丙.醇帶來困難。為彌補標準領域的這一不足，IQTC于2023年6月向食品工業協會提出了團體標準立項申請，并于2023年7月獲得正式立項，總共有12家單位共同參與了為期一年的起草。
參編單位包括：濟寧南天農科化工有限公司、四川洋淼環?？萍加邢薰?、浙江傳化華洋化工有限公司、杭州杭化哈利瑪化工有限公司、廣東良仕工業材料有限公司、珠海紅塔仁恒包裝股份有限公司、山東奧賽新材料有限公司、愛森（中.國）絮凝劑有限公司、索理思（上海）化工有限公司、廣州海關技術中心、保世高（廣州）貿易有限公司、食品工業協會食品接觸材料。
標準主要內容
標準適用于檢測造紙化學品中游離態氯.丙.醇的含量，涵蓋濕強劑、粘缸劑、防油劑等多種化學品。通過直接稀釋-氣相色譜-質譜法和衍生化反應-氣相色譜-質譜法兩種方法，分別適用于不同含量級別的化學品，為造紙企業和上游化學品生產企業提供了科學的檢測和管控方法。
本標準適用于造紙化學品中游離態氯.丙.醇含量的檢測，包括但不限于濕強劑、粘缸劑、防油劑、消泡劑、涂布抗水劑、表面施膠劑、模塑防水劑、改性淀粉、改性松香、改性纖維素、改性樹脂等。
標準采用兩種方法對氯.丙.醇進行檢測：
【方法一】直接稀釋-氣相色譜-質譜法
無需使用昂貴的同位素試劑進行衍生化反應，測試成本低廉、操作簡便，適用于氯.丙.醇含量在ppm數量級的造紙化學品。
▲參考色譜圖【方法一】
【方法二】衍生化反應-氣相色譜-質譜法
通過衍生化反應提高檢測靈敏度，檢出限可低至0.01 mg/kg。
▲參考色譜圖【方法二】

意義和影響
本標準的制定為造紙化學品生產企業做好產品中氯.丙.醇的管控、以及造紙企業做好原材料中氯.丙.醇的管控提供了科學的檢測方法。這也將為下游紙制品企業生產的食品接觸用紙和紙制品做好氯.丙.醇的合規提供重要的解決思路。
IQTC期待與各方開展更多高水平合作，為行業和相關部門提供更多高水平技術服務和解決方案。

以上內容轉自“食品接觸材料科學”公眾號，原標題《造紙化學品中氯.丙.醇的測試方法團標發布》，此公眾由我們總部FCM實驗室運營。
我們總部FCM實驗室可以做團體標準 T/CNFIA 206-2024氯.丙.醇含量的測試，有需求的企業，可以與我們聯系。
聯系人：鄒工

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